ATCC11840標(biāo)準(zhǔn)菌株原裝0代菌株ATCC標(biāo)準(zhǔn)菌株

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以下是一些 ATCC 的保藏資源在藥物研發(fā)中的成功案例:
腫瘤藥物研發(fā):在研發(fā)治療肺癌的新型小分子靶向藥物時(shí),科研人員利用 ATCC 的肺癌細(xì)胞系 A549 進(jìn)行藥物敏感性實(shí)驗(yàn)。通過(guò)將不同濃度的藥物作用于 A549 細(xì)胞,觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制情況、凋亡率變化以及相關(guān)信號(hào)通路蛋白的表達(dá)水平,以此評(píng)估藥物的療效和作用機(jī)制,為后續(xù)藥物的臨床前研究提供重要依據(jù)。
神經(jīng)退行性疾病藥物研發(fā):針對(duì)阿爾茨海默病,研究人員使用 ATCC 的神經(jīng)元細(xì)胞系,如 SH - SY5Y 細(xì)胞,建立疾病模型。通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生 β - 淀粉樣蛋白沉積和 tau 蛋白過(guò)度磷酸化等病理特征,篩選能夠改善這些病理變化的藥物,為尋找治療阿爾茨海默病的有效藥物提供細(xì)胞水平的實(shí)驗(yàn)支持。
助力疫苗生產(chǎn)中的宿主細(xì)胞殘留檢測(cè):在流感疫苗的生產(chǎn)過(guò)程中,通常使用 MDCK 細(xì)胞作為宿主細(xì)胞。為了確保疫苗的安全性,需要對(duì)疫苗中的殘留 MDCK 細(xì)胞基因組 DNA 進(jìn)行檢測(cè)。ATCC 與 USP 合作開發(fā)的定量 MDCK 基因組 DNA 標(biāo)準(zhǔn)品,可用于驗(yàn)證定量 PCR(qPCR)檢測(cè)方法的準(zhǔn)確性和可靠性。通過(guò)將已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品加入到疫苗樣品中,進(jìn)行 qPCR 檢測(cè),建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,從而準(zhǔn)確測(cè)定疫苗中殘留 MDCK 細(xì)胞基因組 DNA 的含量,確保其符合監(jiān)管要求。
支持生物藥生產(chǎn)中的宿主細(xì)胞殘留檢測(cè):對(duì)于使用 HEK - 293 細(xì)胞生產(chǎn)的重組蛋白藥物,ATCC 的 HEK - 293 基因組 DNA 標(biāo)準(zhǔn)品可用于檢測(cè)藥物生產(chǎn)過(guò)程中殘留的宿主細(xì)胞 DNA。在藥物純化過(guò)程的各個(gè)階段,使用該標(biāo)準(zhǔn)品對(duì) qPCR 檢測(cè)方法進(jìn)行校準(zhǔn)和驗(yàn)證,及時(shí)監(jiān)測(cè)并控制殘留 DNA 的水平,保證生物藥的質(zhì)量和安全性。

使用 - 80℃冰箱保存 ATCC 菌株時(shí),需要注意以下幾個(gè)方面的問(wèn)題:
菌株準(zhǔn)備
菌液濃度:確保用于保存的菌株處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,此時(shí)的菌株活力較強(qiáng)。一般來(lái)說(shuō),菌液濃度應(yīng)達(dá)到一定標(biāo)準(zhǔn),例如對(duì)于細(xì)菌,通常要求菌液的 OD 值(光密度)在 0.6 - 0.8 左右,以保證有足夠數(shù)量的活菌用于長(zhǎng)期保存。
保護(hù)劑使用:添加合適的保護(hù)劑是非常關(guān)鍵的。常用的保護(hù)劑如甘油,其終濃度一般在 15% - 30% 之間。甘油濃度過(guò)高可能會(huì)對(duì)菌株產(chǎn)生毒性,過(guò)低則不能有效保護(hù)菌株免受冷凍損傷。在添加甘油時(shí),要確保其與菌液充分混合均勻。
凍存管選擇
材質(zhì)與質(zhì)量:應(yīng)選用高質(zhì)量、耐低溫的凍存管,通常由聚丙烯等材質(zhì)制成。優(yōu)質(zhì)的凍存管具有良好的密封性和耐低溫性能,能防止在 - 80℃環(huán)境下破裂或泄漏。
規(guī)格合適:根據(jù)菌株的量選擇合適規(guī)格的凍存管,一般常用的有 1.5 mL 或 2.0 mL 的凍存管,避免使用過(guò)大或過(guò)小的凍存管,以保證菌液在管內(nèi)有合適的空間,且便于凍存和復(fù)蘇操作。
冷凍過(guò)程
緩慢降溫:為了減少冰晶對(duì)菌株細(xì)胞的損傷,應(yīng)采用緩慢降溫的方式??梢詫⒀b有菌株的凍存管先放入 - 20℃冰箱中預(yù)冷 2 - 4 小時(shí),然后再轉(zhuǎn)移至 - 80℃冰箱。也可以使用專門的冷凍盒,如含有異丙醇的梯度冷凍盒,它能以相對(duì)均勻的速度降溫,使菌株更好地適應(yīng)低溫環(huán)境。
避免反復(fù)凍融:盡量避免對(duì)同一管菌株進(jìn)行多次凍融,因?yàn)槊看蝺鋈谶^(guò)程都可能對(duì)菌株造成損傷,導(dǎo)致菌株活力下降或基因突變。如果需要使用多支凍存管中的菌株,應(yīng)分別取出解凍,而不是將一支凍存管反復(fù)凍融。
冰箱維護(hù)與管理
溫度監(jiān)測(cè):定期監(jiān)測(cè) - 80℃冰箱的溫度,確保其溫度穩(wěn)定在 - 80℃左右,波動(dòng)范圍最好控制在 ±5℃以內(nèi)。可以使用溫度記錄儀或溫度計(jì)進(jìn)行監(jiān)測(cè),并做好記錄。如果發(fā)現(xiàn)溫度異常,應(yīng)及時(shí)查找原因并進(jìn)行修復(fù)。
定期除霜:冰箱內(nèi)的霜層會(huì)影響制冷效果,因此需要定期除霜。除霜時(shí)應(yīng)注意避免對(duì)菌株造成影響,可以將菌株暫時(shí)轉(zhuǎn)移至其他備用的 - 80℃冰箱或液氮罐中,待除霜完成、冰箱恢復(fù)正常溫度后再放回。
空間規(guī)劃:合理規(guī)劃冰箱內(nèi)的空間,將不同類型或來(lái)源的菌株分類存放,并做好標(biāo)記??梢允褂脙龃婕芑騼龃婧羞M(jìn)行整理,以便于查找和取用菌株。同時(shí),要留出一定的空間用于空氣流通,以保證制冷效果均勻。
記錄與標(biāo)識(shí)
詳細(xì)記錄:建立詳細(xì)的菌株保存記錄,包括菌株的名稱、ATCC 編號(hào)、保存日期、保存條件、凍存管數(shù)量等信息。記錄還應(yīng)包括菌株的來(lái)源、相關(guān)的實(shí)驗(yàn)記錄以及任何與菌株特性變化有關(guān)的信息,以便在需要時(shí)進(jìn)行查詢和追溯。
清晰標(biāo)識(shí):在凍存管上用防水、耐低溫的標(biāo)記筆清晰地標(biāo)注菌株的名稱、ATCC 編號(hào)、保存日期等關(guān)鍵信息。也可以使用標(biāo)簽貼紙,但要確保貼紙?jiān)诘蜏丨h(huán)境下不會(huì)脫落或模糊。此外,還可以在凍存架或凍存盒上進(jìn)行標(biāo)識(shí),方便快速定位所需菌株。

美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)的發(fā)展歷程如下:
起源與成立:其前身可追溯至 1921 年,當(dāng)時(shí)美國(guó)陸軍醫(yī)學(xué)博物館接收了著名的溫斯洛培養(yǎng)物收藏,該收藏由美國(guó)細(xì)菌學(xué)家協(xié)會(huì)的華盛頓特區(qū)成員負(fù)責(zé)照料。1925 年,ATCC 正式成立,成為一個(gè)官方實(shí)體,當(dāng)時(shí)保藏的培養(yǎng)物被轉(zhuǎn)移到芝加哥的麥考密克研究所。
早期發(fā)展:1937 年,培養(yǎng)物又遷回華盛頓,隨著收藏的培養(yǎng)物不斷增加和多樣化,空間逐漸變得緊張,ATCC 經(jīng)歷了一系列搬遷,以尋找更大的場(chǎng)地來(lái)容納不斷增長(zhǎng)的生物資源。
中期發(fā)展:在成立后的幾十年里,ATCC 主要依賴政府資金維持運(yùn)營(yíng)。它逐漸發(fā)展成為世界上最大的生物資源中心,保藏的生物材料涵蓋細(xì)菌、真菌、病毒、細(xì)胞系等多種類型。1981 年,ATCC 有 39,000 多培養(yǎng)物發(fā)放給全世界的科學(xué)工作者,并成功地用冷凍和冷凍干燥的方法保存各種細(xì)胞品系。
現(xiàn)代轉(zhuǎn)型:1993 年,雷蒙德?賽普斯擔(dān)任 ATCC 的負(fù)責(zé)人,他致力于重振該組織,提升其在生物科學(xué)領(lǐng)域的知名度,并大力倡導(dǎo)生物研究的標(biāo)準(zhǔn)制定。在他的領(lǐng)導(dǎo)下,ATCC 從一個(gè)單純的非營(yíng)利性保藏機(jī)構(gòu)轉(zhuǎn)變?yōu)橥苿?dòng)生物科學(xué)發(fā)展的重要資源中心。到 21 世紀(jì) 10 年代,ATCC 已成功實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)型,在生物科學(xué)研究領(lǐng)域發(fā)揮著關(guān)鍵作用。
設(shè)施與合作:如今,ATCC 總部位于弗吉尼亞州馬納薩斯,擁有一座 126,000 平方英尺的建筑,其中包括 18,000 平方英尺的生物材料保藏庫(kù)和 35,000 平方英尺的實(shí)驗(yàn)室空間。ATCC 還與全球多個(gè)國(guó)際培養(yǎng)物保藏中心建立了合作關(guān)系,如英國(guó)的國(guó)家植物病原菌收集中心、比利時(shí)的微生物協(xié)調(diào)收集中心、德國(guó)微生物菌種保藏中心、日本生物資源研究收藏中心等,共同推動(dòng)全球生物資源的保藏和研究工作。

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